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有谁能说说RNA-Seq的原理??

优艾设计网 https://www.uibq.com 2023-01-07 08:11 出处:网络 作者:PS自学
_M13****7141 优艾设计网_平面设计 2021-06-03 04:06 高通量测序技术应用到由mRNA逆转录生成的cDNA上,从而获得来自不同基因的mRNA片段在特定样本中的含量,这就是mRNA测序或mRNA-Seq,同样原理,各种类型的转录本都
_M13****7141 优艾设计网_平面设计 2021-06-03 04:06


高通量测序技术应用到由mRNA逆转录生成的cDNA上,从而获得来自不同基因的mRNA片段在特定样本中的含量,这就是mRNA测序或mRNA-Seq,同样原理,各种类型的转录本都可以用深度测序技术进行高通量检测,统称作RNA-Seq。该技术首先将细胞中的所有转录产物反转录为cDNA文库(利用最新的SMS技术可略去这一步,直接对RNA进行测序),然后将cDNA文库中的DNA随机剪切为小片段(或先将RNA片段化后再反转录),在cDNA两端加上接头利用新一代高通量测序仪测序,直到获得足够的序列,所得序列通过比对(有参考基因组)或从头组装(无参考基因组)形成全基因组范围的转录谱。


ty_亮366 2021-06-03 04:11


RNA测序(英语:RNA Sequencing,简称RNA-Seq,也被称为全转录物组鸟枪法测序:Whole Transcriptome Shotgun Sequencing,WTSS)是基于第二代测序技术的转录组学研究方法:
首先提取生物样品的全部转录的RNA,
然后反转录为c-DNA后进行的二代高通量测序,
在此基础上进行片段的重叠组装,
从而可得到一个个的转录本。
进而可以形成对该生物样品当前发育状态的基因表达状况的全局了解(globle)。

进一步说,若和下一阶段的生物样品的RNA-Seq转录组进行比较,则可以得到全部的(在转录层面)基因表达的上调及下调--这就形成了表达谱,针对关键基因则可优艾设计网_PS问答以形成你要想要的pathway的构建。


xiabeilei 优艾设计网_PS百科 2021-06-03 04:14


转录组测序技术,其原理是是把mRNA,smallRNA和 NONcoding RNA等或者其中一些用高通量测序技术把它们的序列测出来。其无需预先针对已知序列设计探针,就可以对任意物种的整体转录活动进行检测,提供更精确的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是当下深入研究转录组复杂性最佳方法之一。


ty_天佑我的爱人1 2021-06-03 04:15


对 RNA进行测序一直以来都被认为是一种发现基因的有效方法,而且这种方法还被认为是对编码基因以及非编码基因进行注释的金标准。与以前的方法相比,大规模 平行RNA测序方法(massively parallel sequencing of RNA)极大增强了RNA测序技术的处理能力,使我优艾设计网_PS问答们得以能够对转录组进行测序。在本文中即将介绍到的这两种RNA测序方法就能以前所未有的精度对转录组 进行分析。Trapnell小组使用的方法是一种名为Cufflinks的软件。这种软件能够随时发现小鼠生肌细胞(myoblast cell)内新出现的转录子,还能在细胞分化时对转录子表达水平进行监测,从而分析基因表达情况和剪接情况。Guttman小组也使用了与 Trapnell小组相类似的软件方法,不过他们使用的是另一种名为Scripture的软件。Scripture软件可以对源自三个小鼠细胞系的转录组 进行再注释(reannotate),从而对数百个最近新发现的lincRNA(large intergenic noncoding RNA)进行完整的基因模式注释。


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