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2021-07-02 02:14
组成基因疫苗的两大要素是目的基因和表达载体。目的基因一般是指编码某抗原的cDNA序列,要求该基因片段能在哺乳动物细胞中表达;载体主要用质粒,因质粒可用大肠杆菌大量生产,但不会在哺乳细胞中复制和整合。常用的有pSV2、pRSV、pcDNA3.1和pCI等质粒。基因疫苗的构建是在细菌质粒上引入一个真核启动子,如人巨细胞病毒早期启动子(CMV-IE),在启动子的下游克隆进感兴趣的目的基因,其后接上PolyA和转录终止序列。简言之,在真核表达质粒上克隆进某抗原基因的cDNA序列,即构成了DNA疫苗或基因疫苗。由于质粒上不仅有大肠杆菌优艾设计网_设计客的复制起点,而且有真核启动子,所以基因疫苗既能在大肠杆菌中复制,又能在真核细胞表达。质粒经细菌扩增,再提取和纯化后溶于生理盐水溶液就可直接用于免疫接种。
组成基因疫苗的两大要素是目的基因和表达载体。目的基因一般是指编码某抗原的cDNA序列,要求该基因片段能在哺乳动物细胞中表达;载体主要用质粒,因质粒可用大肠杆菌大量生产,但不会在哺乳细胞中复制和整合。常用的有pSV2、pRSV、pcDNA3.1和pCI等质粒。基因疫苗的构建是在细菌质粒上引入一个真核启动子,如人巨细胞病毒早期启动子(CMV-IE),在启动子的下游克隆进感兴趣的目的基因,其后接上PolyA和转录终止序列。简言之,在真核表达质粒上克隆进某抗原基因的cDNA序列,即构成了DNA疫苗或基因疫苗。由于质粒上不仅有大肠杆菌优艾设计网_设计客的复制起点,而且有真核启动子,所以基因疫苗既能在大肠杆菌中复制,又能在真核细胞表达。质粒经细菌扩增,再提取和纯化后溶于生理盐水溶液就可直接用于免疫接种。
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