风雨孙策
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2021-07-31 19:26
SELEX技术是指从随机寡核苷酸文库中筛选出对给定靶分子具高亲和力的寡聚物,从而推论出那些对DNA或RNA结合蛋白具有很高亲和力的配体。这些经SELEX筛选出的高亲和序列可应用于多项研究以及疾病的诊断和治疗等。用于筛选转录因子DNA结合序列时,该技术的基本步骤为：先体外化学合成一个两端带有PCR引物复性位点,中间含有待筛选随机序列的单链寡核苷酸文库,通过单引物复性及聚合酶延伸,形成双链DNA文库,再将文库与转录因子蛋白混合,形成“DNA/蛋白质”复合物,分离出复合物中的DNA,并以其为模板进行PCR扩增,进行下一轮筛选过程;通过重复的筛选与扩增,最后得到高亲和力和高特异性的DNA分子。该过程中,最关键一步就是如何将“DNA/蛋白质”复合物从游离DNA中分离出来,经典的筛选技术有凝胶阻滞法、亲和层析法等。
SELEX技术是指从随机寡核苷酸文库中筛选出对给定靶分子具高亲和力的寡聚物,从而推论出那些对DNA或RNA结合蛋白具有很高亲和力的配体。这些经SELEX筛选出的高亲和序列可应用于多项研究以及疾病的诊断和治疗等。用于筛选转录因子DNA结合序列时,该技术的基本步骤为：先体外化学合成一个两端带有PCR引物复性位点,中间含有待筛选随机序列的单链寡核苷酸文库,通过单引物复性及聚合酶延伸,形成双链DNA文库,再将文库与转录因子蛋白混合,形成“DNA/蛋白质”复合物,分离出复合物中的DNA,并以其为模板进行PCR扩增,进行下一轮筛选过程;通过重复的筛选与扩增,最后得到高亲和力和高特异性的DNA分子。该过程中,最关键一步就是如何将“DNA/蛋白质”复合物从游离DNA中分离出来,经典的筛选技术有凝胶阻滞法、亲和层析法等。
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