原位PCR有哪些分类，具体操作步骤是什么？？

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大侠睡着了 2021-08-11 15:25

原位PCR有间接法和直接法两种：间接法是先在细胞内对DNA分子原位扩增，而后进行原位杂交；直接法是将标记的核苷(放射性同位素或荧光素标记的引物)在原位扩增之前加入PCR反应液中，在扩增过程中，标记的核苷酸直接掺入PCR产物中，然后用放射自显影、免疫组织化学或荧光检测技术进行DNA的定位与检测。原位PCR的基本步骤是：① 固定细胞，尽量保存优艾设计网_Photoshop交流细胞固有的形态与结构；② 蛋白酶消化：用胃蛋白酶、蛋白酶K等消化固定后的蛋白质交联网络屏障，使PCR反应试剂与靶DNA充分接触；③ 原位PCR扩增；④ 产物检测：直接法可用放射自显影、免疫组织化学或荧光检测等，间接法需用特异性标记探针进行引物杂交。

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琴之韵涿鹿店 2021-08-11 15:30

原位PCR大致过程，实验用的标本是新鲜组织、石蜡包埋组织、脱落细胞、血细胞等。其基本方法为多聚甲醛固定组织或细胞，蛋白酶消化处理组织；在组织细胞片上滴加PCR优艾设计网_设计反应液进行扩增，覆盖并加液体石蜡后，在原位PCR仪上进行PCR循环扩增，PCR扩增结束后用标记的探针进行原位杂交，最后显微镜观察结果。
原位PCR技术可分为直接法和间接法两大类，此外，还有反转录原位PCR技术等，
原位反转录 PCR(in situ reverse transcription PCR, In Situ RT-PCR)是将液相的RT-PCR技术应用到组织细胞标本中的一种新技术，与RT-PCR（液相）不同点在于，进行原位反转录PCR反应之前，组织标本要先用DNA酶处理，以破坏组织中的DNA酶，这样才能保证扩增的模板是从mRNA反转录合成的cDNA，而不是细胞中原有的DNA。其它基本步骤与液相的RT-PCR相似。

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