什么是无选择性标记基因技术？？

刘鹏 2021-08-20 15:35

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无选择性标记基因技术可分为两大类:一类是去除选择性标记基因的方法,这类方法大至有4种:一种是共转化法,这种方法是将功能基因和筛选基因构建到不同的载体或是同一载体的不同位点上,然后同时转化受体细胞,最后可以获得两个基因共整合的转化植株,其中一部分转化植株的这两个基因并不连锁,鉴定后通过后代的有性分离可获得只转入功能基因的植株,最终达到删除选择性标记基因的目的。第二种是位点特异性重组,它是由重组酶和它的识别位点组成,识别位点正向排列时,重组酶就可以专一地催化这两个识别位点,最终导致它们之间的所有基因序列被切除,实现重组。位点特异性重组系统包括Cre/lox系统、FLP/FRT系统、R-RS系统等。Dale等首次将Cre/loxP系统用于转基因烟草,成功地剔除了hpt标记基因。在烟草中的研究发现,FLP/FRT系统重组删除效率在19%~47%。因此,Flp/frt系统在植物中应用的情况远不如Cre/lox系统。近几年这两个系统在白杨中也进行了广泛研究并取得了一定成果。第三种是转座子介导的再定位法,例如玉米的Ac/DS转座系统,Yoder等和Goldsbrough等利用这种方法转化成功,报道表明了这个系统能够使目的基因进行再定位,从而产生无标记基因植株。第四种是同源重组法,它是将重复序列之间插入标记基因,重复序列进行同源重组来切除标记基因,重复序列可以是基因表达框的任何部分,Zubko等的研究表明这种方法可获得无标记基因的植株。这一类的共同点都是将选择标记基因和目的基因整合到不连锁的位点上,杂交筛选后去除标记基因。另一类是无标记基因直接转化法,主要利用基因枪法和花粉管通道法进行转化,转化的基因只含有启动子、目的基因和终止子序列,首次是用基因枪法在水稻上转化成功的,在小麦、马铃薯等作物中也得到应用。用花粉管通道法也成功地应用到大豆和玉米。

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