GDF-5基因重组腺病毒研究有什么意义？是怎样实现基因重组的？？

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麦无敌 2021-10-23 11:58

GDF优艾设计网_设计-5基因重组腺病毒研究是为进一步研究GDF-5的生物学功能及其相关疾病的基因治疗奠定基础。近日，南充市中心医院研究人员发表论文，旨在应用AdEasy-1腺病毒载体系统构建人生长分化子-5（GDF-5）基因重组腺病毒载体，并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。研究指出，利用AdEasy-1腺病毒载体系统成功构建了携带人GDF-5基因的重组腺病毒载体，并制备出高滴度值的重组腺病毒Ad-GDF-5，该文发表在2014年第12期《重庆医学》杂志上。
将PCR获取的GDF-5基因插入到质粒pMD19-T中，基因测序鉴定后将目的基因克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV，HindⅢ酶切鉴定。重组质粒经PmeⅠ酶切使之线性化并去磷酸化处理，电转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌BJ5183，使其在细菌内发生同源重组，卡那霉素筛选，HindⅢ酶切鉴定阳性克隆，扩增重组腺病毒质粒，并转染HEK293细胞，包装成重组腺病毒Ad-GDF-5，分别采用Western blot、TCID50法对Ad-GDF-5进行蛋白鉴定和滴度测定。
经PCR扩增得到的GDF-5大小约为1.7kb，基因测序结果证实该基因与GENBANK中人GDF-5基因序列相同。pShuttle-CMV-GDF-5、pShuttle-CMV-GDF-5-AdEasy-1经HindⅢ酶切后均得到大小约为1.7kb的片段，与GDF-5大小相符。Western blot证实Ad-GDF-5感染HEK293细胞后大量表达成熟GDF-5蛋白。研究结果表明成功地构建了携带人GDF-5基因的重组腺病毒载体，并制备出5.6×109 PFU/mL的重组腺病毒。

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